快速非培養(yǎng)法檢測(cè)真菌具有重要的意義，真菌通用PCR試劑盒就是根據(jù) PCR 原理開發(fā)的專門檢測(cè)真菌的試劑盒。

真菌通用PCR試劑盒

產(chǎn)品內(nèi)容：

產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)：

1.即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板。

2.產(chǎn)品經(jīng)過(guò)精心優(yōu)化，分析靈敏度高，可以達(dá)到 100 拷貝/反應(yīng)。

3.提供陽(yáng)性對(duì)照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4.特異性高，引物是根據(jù)真菌通用 DNA 高度保守區(qū)設(shè)計(jì)，不會(huì)跟除此之外的其它 DNA 發(fā)生交叉反應(yīng)。

5.本產(chǎn)品足夠 50 次 20 ?L 體系的 PCR 反應(yīng)。

6.本產(chǎn)品只能用于定性實(shí)驗(yàn)，不能用于定量。

7.本產(chǎn)品只能用于科研。

儲(chǔ)存條件及有效期：

低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為 24 個(gè)月。

自備試劑：

樣品 DNA

1. 如果有 N 個(gè)樣品，必須設(shè)置 N+2 個(gè)提取反應(yīng)，多出的兩個(gè)中一個(gè)是 PC（樣品制備陽(yáng)性對(duì)照），一個(gè)是 NC（樣品制備陰性對(duì)照）。可以用 10 ?L 真菌通用 PCR 陽(yáng)性對(duì)照（1×10E7 拷貝/?L，本試劑盒提供）再加上一定量的水作為制備的陽(yáng)性對(duì)照（加水后其總體積跟樣品一樣，樣品體積多少取決于  所用試劑盒的要求）。可以用水作為制備的陰性對(duì)照。

2.用自選方法純化上述 N+2 個(gè)樣品的 DNA。本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù) DNA-提取試劑盒兼容。也可以選用本公司的核酸-提取試劑盒或免提取核酸釋放劑。

應(yīng)用范圍：

常規(guī)PCR；T/A克隆；菌落PCR鑒定。

PCR過(guò)程：

1.變性

當(dāng)反應(yīng)混合物加熱0.5至2分鐘至94°C時(shí)，發(fā)生變性。

由于 DNA 兩條鏈之間的氫鍵斷裂，形成單鏈DNA。

單條 DNA鏈現(xiàn)在充當(dāng)合成其他 DNA鏈的模板。

2.退火

持續(xù)約20至40秒，反應(yīng)溫度降至54至60℃。

在這種情況下，引物附著在模板 DNA的互補(bǔ)序列上。

引物序列是20-30個(gè)堿基長(zhǎng)的單鏈 DNA或RNA片段。

它們充當(dāng) DNA生產(chǎn)的前體。

有兩個(gè)引物-正向引物和反向引物一一兩條分離的鏈以相反的方向延伸。

3.延伸

在此階段溫度升高至72至80攝氏度之間。

Taq聚合酶將堿基固定到引物的3'未端。結(jié)果,DNA從5'延伸至3'。

Taq聚合酶可以承受極-高的溫度。結(jié)果產(chǎn)生雙鏈DNA分子。

為了在短時(shí)間內(nèi)獲得多個(gè)感興趣的 DNA序列，這三個(gè)過(guò)程需要進(jìn)行20-40次。

產(chǎn)品推薦：