乙型肝炎病毒（Hepatitis B Virus, HBV）是引起乙型肝炎（簡稱乙肝）的病原體，屬嗜肝 DNA 病毒科，該科病毒包含正嗜肝 DNA 病毒屬和禽嗜肝DNA 病毒屬兩個(gè)屬，引起人體感染的是正嗜肝 DNA 病毒屬。HBV 感染是性的公共衛(wèi)生問題，HBV 檢測具有重要的意義。為此本公司開發(fā)了簡單快捷的乙型肝炎病毒基因分型（HBV-A/B/C）熒光PCR檢測試劑盒。

乙型肝炎病毒基因分型(HBV-A/B/C)熒光PCR試劑盒【檢驗(yàn)原理】

本試劑盒采用探針法實(shí)時(shí)熒光 PCR 技術(shù)，設(shè)計(jì)一對乙型肝炎病毒基因特異性引物，結(jié)合一條特異性探針，用熒光 PCR 技術(shù)對乙型肝炎病毒基因的核酸進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測，用于臨床上對病原學(xué)輔助診斷。

【儲存條件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存、運(yùn)輸、反復(fù)凍融少于 7 次，有效期 12 個(gè)月。

【適用儀器】

ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。

說明：不同批號的試劑盒組分不可交互使用。

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1.1 DNA 提取

1) 對上述處理好的標(biāo)本加入等體積核酸提取液（固體標(biāo)本加入50μL 核酸提取液）， 100℃恒溫處理 10min，13,000 rpm 離心 5min，取上清液轉(zhuǎn)移至新的 1.5mL EP 管，-20℃保存；

2) DNA 的提取也可以采用上海晅科生物科技有限公司生產(chǎn)的DNA 提取試劑盒（離心柱提取法），請嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

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2. 檢測方法的局限性

a. 樣本檢測結(jié)果與樣本收集、處理、運(yùn)送以及保存質(zhì)量有關(guān)；

b. 樣本提取過程中沒有控制好交叉污染，會出現(xiàn)假陽性結(jié)果；

c. 陽性對照、擴(kuò)增產(chǎn)物泄漏，會導(dǎo)致假陽性結(jié)果；

d. 病原體在流行過程中基因突變、重組，會導(dǎo)致假陰性結(jié)果；

e. 不同的提取方法存在提取效率差異，會導(dǎo)致假陰性結(jié)果；

f. 試劑運(yùn)輸，保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測效能下降，出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準(zhǔn)確的結(jié)果；

g. 本檢測結(jié)果僅供參考，如須確診請結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測手段。

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1.1 結(jié)果判斷

陽性：檢測通道 Ct 值≤35.0，且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線。

可疑：檢測通道 Ct 值>35.0，且出現(xiàn)典型擴(kuò)增曲線的樣本建議重復(fù)試驗(yàn)，重復(fù)試驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn) Ct 值≤35.0 和典型擴(kuò)增曲線者為陽性，否則為陰性。

陰性：樣本檢測結(jié)果無 Ct 值且無明顯的擴(kuò)增曲線。

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