致病性大腸桿菌（EPEC）熒光PCR試劑盒其易感染性和潛伏性給畜牧業以及貿易帶來嚴重的經濟損失，因此致病性大腸桿菌的快速準確鑒定對該病的預防和檢疫有著重要作用，為此本公司開發了簡單快捷的致病性大腸桿菌熒光定量PCR檢測試劑盒。

致病性大腸桿菌(EPEC)熒光PCR試劑盒【檢驗原理】

本試劑盒采用探針法實時熒光 PCR 技術，設計一對致病性大腸桿菌特異性引物，結合一條特異性探針，用熒光 PCR 技術對致病性大腸桿菌的核酸進行體外擴增檢測，用于臨床上對病原學輔助診斷。

【儲存條件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存、運輸、反復凍融少于 7 次，有效期 12 個月。

【適用儀器】

ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。

說明：不同批號的試劑盒組分不可交互使用。

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1.1 結果判斷

陽性：檢測通道 Ct 值≤35.0，且曲線有明顯的指數增長曲線。

可疑：檢測通道 Ct 值>35.0，且出現典型擴增曲線的樣本建議重復試驗，重復試驗結果出現 Ct 值≤35.0 和典型擴增曲線者為陽性，否則為陰性。

陰性：樣本檢測結果無 Ct 值且無明顯的擴增曲線。

2. 檢測方法的局限性

a. 樣本檢測結果與樣本收集、處理、運送以及保存質量有關；

b. 樣本提取過程中沒有控制好交叉污染，會出現假陽性結果；

c. 陽性對照、擴增產物泄漏，會導致假陽性結果；

d. 病原體在流行過程中基因突變、重組，會導致假陰性結果；

e. 不同的提取方法存在提取效率差異，會導致假陰性結果；

f. 試劑運輸，保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降，出現假陰性或定量檢測不準確的結果；

g. 本檢測結果僅供參考，如須確診請結合臨床癥狀以及其他檢測手段。

3. 質控標準

陰性質控品：無明顯擴增曲線或無 Ct 值顯示；

陽性質控品：擴增曲線有明顯指數生長期，且 Ct 值≤32； 以上條件應同時滿足，否則實驗視為無效。

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1.1 DNA 提取

1) 對上述處理好的標本加入等體積核酸提取液（固體標本加入50μL 核酸提取液）， 100℃恒溫處理 10min，13,000 rpm 離心 5min，取上清液轉移至新的 1.5mL EP 管，-20℃保存；

2) DNA 的提取也可以采用上海晅科生物科技有限公司生產的DNA 提取試劑盒（離心柱提取法），請嚴格按照試劑盒說明書進行操作。

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