禽流感是由A型流感病毒所引起的禽類疾病。H5/H7除了感染禽類外，部分亞型也能夠引起人感染或發(fā)病。野生水禽是禽流感病毒的自然宿主，一般對其不致病，當(dāng)它們傳染給其它物種時有時會造成大的發(fā)病率和死亡率。禽流感病毒H5/H7/H9（H5/H7/H9熒光PCR試劑盒分別對禽流感H5/H7/H9設(shè)計特異性的引物和探針，用一步法熒光RT-PCR技術(shù)對H5/H7/H9 RNA進行體外擴增檢測。

禽流感病毒H5/H7/H9(H5/H7/H9熒光PCR試劑盒說明書

【產(chǎn)品名稱】

商品名稱：禽流感病毒H5/H7/H9亞型(AIV-H5/H7/H9)核酸檢測試劑盒(實時熒光-PCR法)

Name ：Avian influenza virus H5/H7/H9 subtype (AIV-H5/H7/H9) nucleic acid detection kit (real-time fluorescence-PCR method)

【包裝規(guī)格】48T/盒

【預(yù)期用途】

禽流感是由A型流感病毒所引起的禽類疾病。禽流感病毒H5/H7/H9亞型(AIV-H5/H7/H9)除了感染禽類外，部分亞型也能夠引起人感染或發(fā)病。野生水禽是禽流感病毒的自然宿主，一般對其不致病，當(dāng)它們傳染給其它物種時有時會造成大的發(fā)病率和死亡率。

本試劑盒適用于檢測標本中的禽流感病毒H5/H7/H9亞型(AIV-H5/H7/H9)，適用于禽流感病毒H5/H7/H9亞型(AIV-H5/H7/H9)感染的輔助診斷及流行病學(xué)調(diào)查。

【檢驗原理】

本試劑盒分別對禽流感病毒H5/H7/H9亞型(AIV-H5/H7/H9)設(shè)計特異性的引物和探針，用一步法熒光RT-PCR技術(shù)對AIV-H5/H7/H9 RNA進行體外擴增檢測。

【試劑組成】

注：

1）不同批號試劑不能混用。

2）試劑盒內(nèi)各試劑組份足夠包裝規(guī)格所標示的檢測次數(shù)。

【儲存條件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存、運輸、反復(fù)凍融少于 7 次，有效期 9 個月。

【適用儀器】

ABI 系列 、安捷倫 MX3000P/3005P 、MJ Opticon2 、Eppendorf 2/4 Color Systems、Bio-RadCFX96 等熒光定量 PCR 檢測儀。

【標本采集】

病死或撲殺禽，取喉氣管、腦、胸肌、心肌和肺等組織；待檢活禽，用棉拭子取呼吸道分泌物或排泄物，置于 1mL 50%甘油生理鹽水中。

【保存和運輸】

上述標本短期內(nèi)可保存于-20℃，長期保存可置-70℃，但不能超過 6 個月，標本運送應(yīng)采用 2~8℃冰袋運輸，嚴禁反復(fù)凍融。

【使用方法】

1.樣品處理（樣本處理區(qū)）

1.1樣本前處理

每份組織分別從 3 個不同的位置稱取樣品約 1g，手術(shù)剪剪碎混勻后取 0.5g 于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理鹽水后繼續(xù)研磨，待勻漿后轉(zhuǎn)至 1.5mL 滅菌離心管中， 8000rpm 離心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中；棉拭子直接取 100 μL 提取。

1.2RNA 提取

推薦采用上海晅科生物科技有限公司生產(chǎn)的 RNA 提取試劑盒（離心柱提取法），請按照試劑盒說明書進行操作。

2.試劑配制（試劑準備區(qū)）

根據(jù)待檢測樣本總數(shù)，設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對照+1 管陽性對照；樣品每滿 7 份，多配制 1 份)，每測試反應(yīng)體系配制如下表：

3.加樣（樣本處理區(qū)）

將步驟 1 提取的 RNA、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μL，分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。

4.PCR 擴增（核酸擴增區(qū)）

4.1將待檢測反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi)；

4.3推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：

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