漢坦病毒IgG/IgM酶聯(lián)免疫檢測試劑盒實驗原理
包被孔中包被了重組的漢灘型漢坦病毒核殼體蛋白。在檢測IgM抗體時，為了避免由IgG抗體或類風(fēng)濕因子引起的非特異性因素的干擾，病人血清必須與類風(fēng)濕因子IgG吸附劑一起孵育。
實驗過程孵育期間，抗重組漢坦病毒抗原的特異性抗體會結(jié)合到固相包被板上。洗板后，我們分別用過氧化酶標(biāo)記的抗人IgG和IgM抗體檢測特異性的IgG和IgM。

漢坦病毒IgG/IgM酶聯(lián)免疫檢測試劑盒使用說明書

【用途】

流行性出血熱(EHF)又稱腎病綜合征出血熱(HFRS)，是由漢坦病毒(Hantaan type)引起的。與流行性*病相比(因近距離接觸普馬拉病毒而被傳染)，HFRS的傳染性更嚴(yán)重，一般都會伴隨有尿毒癥、呼吸麻痹和伴隨有典型休克綜合癥的出血，甚至死亡。這種疾病起初的癥狀是流行性感冒樣癥狀。HFRS起初的典型癥狀是血小板減少癥和白細(xì)胞增多癥。漢坦病毒主要分布于亞洲和巴爾干各邦地區(qū)，通過直接接觸嚙齒動物、嚙齒動物的排泄物或分泌物而傳染給人。士兵、農(nóng)民和露營者都特別容易受到危險。

【試驗原理】

包被孔中包被了重組的漢灘型漢坦病毒核殼體蛋白。在檢測IgM抗體時，為了避免由IgG抗體或類風(fēng)濕因子引起的非特異性因素的干擾，病人血清必須與類風(fēng)濕因子IgG吸附劑一起孵育。
實驗過程孵育期間，抗重組漢坦病毒抗原的特異性抗體會結(jié)合到固相包被板上。洗板后，我們分別用過氧化酶標(biāo)記的抗人IgG和IgM抗體檢測特異性的IgG和IgM。加入底物液后顯色，溶液所顯示的顏色強(qiáng)度與結(jié)合的抗體量成正比。之后用酶標(biāo)儀讀取OD值。

【主要組成成份】

【儲存條件及有效期】

1.     2~8℃避光保存，防止冷凍，有效期為12個月。

2.     包被板開封后2~8℃避光保存，使用期限為15天。

【適用儀器】

含450nm和630nm波長酶標(biāo)儀；37℃恒溫設(shè)備；可調(diào)微量移液器。

【樣本要求】

1.     為取得Z佳實驗效果，避免使用含疊氮鈉、高血脂、長菌以及嚴(yán)重溶血的樣品；

2.     短期（7天）將進(jìn)行檢測的血清樣品可存放于2～8℃；如需長期保存，應(yīng)置于-20℃或以下，避免反復(fù)凍融。

【檢驗方法】

1.      洗滌液配制：用蒸餾水或去離子水將濃縮洗滌液（2號液）按1：10稀釋（如取50ml濃縮液與450ml蒸餾水或去離子水），充分混勻即為工作洗滌液。

2.      樣本稀釋：用樣本稀釋液（5號液）將待檢血清按1:100稀釋（如5μl血清＋495μl樣本稀釋液），充分混勻。 陰性、陽性對照品不用稀釋，直接加樣。

3.      加樣反應(yīng)：每次試驗設(shè)陰性對照2孔、陽性及空白對照各1孔（分別加入陰性、陽性對照及樣本稀釋液100μl）。樣本檢測孔每孔加已稀釋血清樣本100μl。37℃避光反應(yīng)30分鐘。甩去孔內(nèi)液體，每孔注滿工作濃度洗滌液洗滌3次，每次均需停留1分鐘；后一次甩凈，拍干。

4.       加酶反應(yīng)：除空白對照孔外，其余每孔加酶結(jié)合物（1號液）1滴，37℃避光反應(yīng)30分鐘。甩去孔內(nèi)液體，如上洗滌，拍干。

5.        顯色反應(yīng)：加底物（3號液）和顯色劑（4號液）各1滴，混勻，37℃下避光顯色10分鐘。

6.        終止反應(yīng)： 加終止液（6號液）1滴，以空白對照調(diào)零，用酶標(biāo)儀于450nm波長（630nm作為參比波長）讀取OD值。

【參考值】

1.     Cut-off 值 (COV)=陰性對照平均OD值×2.1 (陰性對照孔OD值＜0.08時按0.08計)。

2.     有效性判定：

空白對照孔OD值＜0.05（若大于0.05則實驗無效）；

陰性對照孔OD值≤0.10（若大于0.10則實驗無效）；

陽性對照孔OD值≥0.30（若小于0.30則實驗無效）。

【檢驗結(jié)果的解釋】

樣本OD值≥COV值時，判為禽流感病毒抗體陽性；

樣本OD值＜COV值時，判為禽流感病毒抗體陰性。                        

【檢驗方法的局限性】本試劑僅適用于檢測鴨血清。

【注意事項】

1.     包被板須密封防潮。從冷藏環(huán)境中取出時，應(yīng)平衡至室溫后，方可開封啟用。未使用完的板條應(yīng)即時放回有干燥劑的自封袋中，4℃密封保存。

2.     滴加試劑前應(yīng)將滴瓶輕搖、混勻，首滴棄去；滴加試劑時瓶身應(yīng)保持豎直。

3.     瓶蓋每次使用后要蓋緊，各瓶蓋之間不可混用。不同批號試劑盒的試劑組份不可混用。

4.     孵育時，推薦使用水浴箱。如無水浴箱，可取密封濕盒放入37℃溫箱內(nèi)使用。

5.     用棄的試劑盒及樣本都應(yīng)按污染物妥善處理。試劑盒內(nèi)終止液有腐蝕性，須小心使用。

試劑盒應(yīng)當(dāng)在2~8℃運(yùn)輸和儲存，避免高溫和陽光直射，沒有打開的試劑能保存到有效期。包被條在封閉的袋子內(nèi)2~8℃能保存到有效期。準(zhǔn)備好的試劑的儲存及其穩(wěn)定性在相應(yīng)章節(jié)已闡明。
開封的微孔板密封放置2-8℃下可保存至有效期

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